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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運(yùn)動(dòng)蛋白，小G蛋白效應(yīng)物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。
(Cat. # PHDG1-A) 300 Slides
產(chǎn)品用途包括
· 固定組織切片和組織培養(yǎng)細(xì)胞制劑中肌動(dòng)蛋白絲的熒光染色。 注意：與許多肌動(dòng)蛋白抗體不同，Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合，導(dǎo)致低背景熒光。此外，通過Acti染色結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白在物種之間沒有明顯差異。
· 體外穩(wěn)定熒光肌動(dòng)蛋白絲的制備。
肌動(dòng)蛋白染色在確定活細(xì)胞和固定細(xì)胞中細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架在活細(xì)胞中是非常動(dòng)態(tài)和不穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，但是在探測(cè)或染色肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)之前可以用多聚甲醛固定。
材料
鬼筆環(huán)肽是來自蘑菇傘形毒蕈的七氨基酸肽毒素，其特異性地并且以高親和力（Kd 20nM）結(jié)合至肌動(dòng)蛋白的聚合形式（F-肌動(dòng)蛋白）。鬼筆環(huán)肽將肌動(dòng)蛋白聚合的臨界濃度降低至小于1μg/ ml，從而充當(dāng)聚合增強(qiáng)劑。鬼筆環(huán)肽已經(jīng)用專有的綠色熒光染料標(biāo)記，使其可用于染色組織培養(yǎng)細(xì)胞和組織切片中的肌動(dòng)蛋白絲（1，參見圖1）和無細(xì)胞制劑。Acti-stain™488鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲保留了未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白的許多功能特征，包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼筆環(huán)肽以橙色固體形式提供。
注意：鬼筆環(huán)肽是有毒的，必須小心處理（LD50人= 2mg / Kg）。
示例結(jié)果和規(guī)格
| 圖1.在瑞士3T3細(xì)胞中用Acti-stain TM 488染色的肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維。 |
| 圖2. Acti-stain™鬼筆環(huán)肽的發(fā)射和激發(fā)掃描 |
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| 用抗 - 紐蛋白（紅色），Dapi（藍(lán)色細(xì)胞核）和F-肌動(dòng)蛋白染色的Swiss 3T3細(xì)胞用Acti-stain TM 488（綠色F-肌動(dòng)蛋白，Cat。＃PHDG1）染色。 |
| Acti-stain TM 488的吸光度和熒光掃描。將標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽稀釋到甲醇中，并分別在350-750和500-750nm之間掃描其吸光度和激發(fā)光譜。吸光度峰值在500nm處，熒光在550nm處。 |
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Acti-stain鬼筆環(huán)肽是可用的明顯的鬼筆環(huán)肽。表1描述了它們對(duì)F-肌動(dòng)蛋白的亮度，光穩(wěn)定性，背景和親和力常數(shù)。將這些性能特征與其他熒光鬼筆環(huán)肽進(jìn)行比較，您將看到使用Acti-stain™來滿足肌動(dòng)蛋白染色要求的優(yōu)勢(shì)。
表1.熒光鬼筆環(huán)肽的生物化學(xué)特征
共軛 | 貨號(hào) | 波長（Ex / Em） | 亮度（AFU *） | 光漂白的穩(wěn)定性（以秒為單位的半衰期**） | 背景 （總AFU在100nM時(shí)的百分比**） | 親和力（Kd，納摩爾） |
熒光毒傘素 | na | 485/535 FITC濾波器組 | 432 | 6 | 22 | 72 +/- 12 |
Acti-stain™488 | PHDG1 | 485/535 FITC濾波器組 | 832 | 57 | 五 | 55 +/- 8 |
Acti-stain™535 | PHDR1 | 535/585 TRITC濾波器組 | 430 | 27 | 12 | 36 +/- 7 |
Acti-stain™555 | PHDH1 | 535/585 TRITC濾波器組 | 551 | 46 | 16 | 63 +/- 8 |
Acti-stain™670 | PHDN1 | 640/680 Cy5濾光片組 | 332 | 8 | 18 | 50 +/- 12 |
* = AFU通過定量細(xì)胞成像測(cè)量。** =在沒有抗褪色的情況下在染色的Swiss 3T3細(xì)胞中測(cè)量。
引用：
oitbak等，2011。微小RNA在神經(jīng)干細(xì)胞支持內(nèi)皮形態(tài)發(fā)生中的作用。血管細(xì)胞。v 3，p 25。
Yuan et al。，2012。使用同量異位標(biāo)簽對(duì)胺代謝物進(jìn)行亞秒級(jí)絕dui定量，以發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的通路活化。肛門?；瘜W(xué)。第84頁，第2892-2899頁。
問題1：我可以使用熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色活細(xì)胞中的F-肌動(dòng)蛋白嗎？
答案1： 不幸的是，不，鬼筆環(huán)肽不能用于在活細(xì)胞中染色F-肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽用于在固定細(xì)胞中染色F-肌動(dòng)蛋白。熒光鬼筆環(huán)肽僅與F-肌動(dòng)蛋白的天然四級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)合，提供低背景。鬼筆環(huán)肽結(jié)合的正確固定條件是在PBS中的3.7％（v / v）多聚甲醛10分鐘，因?yàn)樗Ａ袅斯砉P環(huán)肽的高親和力結(jié)合所必需的季銨蛋白結(jié)構(gòu)。甲醇固定破壞天然構(gòu)象，因此不適合用鬼筆環(huán)肽染色F-肌動(dòng)蛋白。為了監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)，建議微量注射羅丹明標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白（Cat。＃APHR或AR05）。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱這些數(shù)據(jù)表。
問題2：哪種熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽穩(wěn)定/亮？
答案2： Acti-stains中亮和穩(wěn)定的是Acti-stain 488（綠色熒光; Cat。＃PHDG1）。有關(guān)我們所有Acti-stains的更多信息，請(qǐng)參閱下表。
共軛 | 貓。＃ | 波長（Ex / EM） | 亮度（AFU） | 光漂白的穩(wěn)定性*（1/2秒壽命） | 背景（總AFU在100 nM時(shí)的百分比） |
Acti-stain™488 | PHDG1 | 535分之485 | 832 | 57 | 五 |
Acti-stain™535 | PHDR1 | 585分之535 | 430 | 27 | 12 |
Acti-stain™555 | PHDH1 | 585分之535 | 551 | 46 | 16 |
Acti-stain™670 | PHDN1 | 六百八十零分之六百四十 | 332 | 8 | 18 |
* =在沒有抗褪色的情況下測(cè)量。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 | |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton | |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton | |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton | |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton | |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton | |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton | |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton | |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton | |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton | |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton | |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton | |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton | |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton | |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton | |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton | |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton | |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton | |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton | |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton | |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton | |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton | |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton | |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton | |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton | |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton | |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton | |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton | |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton | |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton | |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton | |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton | |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton | |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton | |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton | |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton | |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton | |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton | |
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