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目標	1,25-二羥基維生素D3（骨化三醇）
反應性	一般（所有物種）
經(jīng)過測試的應用	ELISA法
建議稀釋	宜稀釋/濃度應由終用戶確定。
存儲	出廠時溫度為4°C。收到后，請按照試劑盒手冊中的存放說明存放試劑盒。
有效期	該套件的有效期為6個月。
穩(wěn)定性	試劑盒的穩(wěn)定性取決于活性喪失的速率。在適當?shù)拇鎯l件下，有效期內(nèi)的丟失率小于5％。為了大程度地降低性能波動，應嚴格控制操作程序和實驗室條件。還強烈建議整個測試始終由同一用戶執(zhí)行。
測試范圍	15.6 pg / ml-1000 pg / ml
靈敏度	<3.6皮克/毫升
標準格式	凍干
ELISA檢測	比色法
ELISA數(shù)據(jù)	定量的
樣品類型	血清，血漿和其他生物液體。
測定原理	該試劑盒基于三明治酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)。將抗體預包被到96孔板上。將標準品，測試樣品和生物素偶聯(lián)試劑添加到孔中并孵育。然后加入結(jié)合了HRP的試劑，并孵育整個平板。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的結(jié)合物。TMB底物用于定量HRP酶促反應。添加TMB底物后，只有含有足夠量的骨化三醇的孔才會產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，然后在加入酸性終止溶液后變?yōu)辄S色。黃色的強度與結(jié)合在板上的骨化三醇的量成比例。在酶標儀中于450 nm處用分光光度法測量光密度（OD），由此可計算出骨化三醇的濃度。
套件組件	預涂96孔微孔板標準標準稀釋液洗滌緩沖液檢測試劑A 檢測試劑B 稀釋劑A 稀釋劑B TMB基板停止解決方案封口機
必需但未提供的材料	37°C恒溫箱多通道和單通道移液器以及無菌移液器吸頭噴瓶或自動微孔板清洗機 1.5毫升管蒸餾水吸收性濾紙 100毫升和1升刻度量筒酶標儀（波長：450 nm） ELISA搖床
試劑準備	1）標準液：用推薦體積的標準稀釋液配制標準液，制成標準溶液。然后，按照協(xié)議中的說明，使用標準稀釋劑緩沖液對標準溶液進行系列稀釋。 2）洗滌緩沖液：按照協(xié)議中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。 3）檢測試劑制備：計算所需工作溶液的總體積。用稀釋劑A和稀釋劑B分別以1：100稀釋檢測試劑A和檢測試劑B。
測定步驟	1）設置標準品，測試樣品和對照孔。 2）將100μl稀釋的標準液分裝到標準孔中。 3）將100μl標準稀釋緩沖液等分到對照（零）孔中。 4）將100μl稀釋樣品等分到樣品孔中。在37°C下孵育1小時。 5）將100μl檢測試劑A分裝到每個孔中。在37°C下孵育1小時。 6）洗3次。 7）將100μl檢測試劑B分裝到每個孔中。在37°C下孵育30分鐘。 8）洗5次。 9）將90μlTMB底物等分到每個孔中。在37°C下孵育10-20分鐘。 10）分裝50μl終止溶液。 11）在450 nm下測量OD。
協(xié)議	使用前，將試劑盒的組分和樣品平衡至室溫（18-25°C）。建議為每個測試繪制標準曲線。 1.在預涂板上分別設置標準孔，測試樣品孔和對照孔（零孔），然后記錄其位置。建議測量每個標準品和樣品至少一式兩份。 2.將100 µL的每種標準品，對照品和樣品加入適當?shù)目字?。用蓋密封板并在37°C下孵育1小時。 3.取下蓋子并丟棄液體。 4.向每個孔中添加100μl檢測試劑A工作溶液。用蓋密封板并在37°C下孵育1小時。 5.取下蓋子并丟棄溶液。用1X Wash Buffer清洗板3次。 6.將100 µL檢測試劑B工作溶液添加到每個孔中，密封并在37°C孵育30分鐘。 7.棄去溶液并按照上一步中的說明用洗滌緩沖液將板洗滌5次。 8.將90μlTMB底物等分到每個孔中。用蓋密封板并在37°C下孵育10-20分鐘。避免暴露在光線下。孵育時間僅供參考，宜時間應由終用戶確定。請勿超過30分鐘。 9.向每個孔中加入50 µL終止溶液。立即在450 nm處讀取。
結(jié)果計算	為了進行計算，請對每個參考標準品和每個樣品的OD450重復讀數(shù)取平均值，然后減去平均對照（零）OD450讀數(shù)?？梢詫藴是€繪制為每種參考標準溶液（Y）的相對OD450與每種標準溶液（X）的各自濃度的關(guān)系。樣品的骨化三醇濃度可以從標準曲線內(nèi)插。
可用性	在5-12個工作日內(nèi)發(fā)貨。
注意	本產(chǎn)品僅供研究使用。范圍和靈敏度可能會發(fā)生變化。請與我們聯(lián)系以獲取新的產(chǎn)品信息。為了獲得準確的結(jié)果，必須將樣品濃度稀釋到試劑盒的中間范圍。請注意，我們的ELISA和CLIA試劑盒針對檢測天然樣品（而非重組蛋白）進行了優(yōu)化。我們無法保證檢測到重組蛋白，因為它們與天然蛋白可能具有不同的序列或三級結(jié)構(gòu)。

abbexa abx513030說明書

1,25-Dihydroxyvitamin D3 (Calcitriol) ELISA Kit

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