Golgi-Cox染色法(高爾基染色法)是研究神經(jīng)元樹(shù)突和樹(shù)突棘形態(tài)的zui有效技術(shù)之一，但存在可靠性和耗時(shí)的缺點(diǎn)。為了克服這些缺點(diǎn)，fdneurotech開(kāi)發(fā)了FD Rapid GolgiStain^TM Kit（快速高爾基染色試劑盒），該工具基于Ramo′n-Moliner和Glaser和Van der Loos的方法，顯著改進(jìn)并簡(jiǎn)化了Golgi-Cox技術(shù)。

通過(guò)使用FD Rapid GolgiStain^TM Kit，可以在動(dòng)物和死后的人類大腦中分析樹(shù)突的形態(tài)參數(shù)，如樹(shù)突長(zhǎng)度、分支模式以及樹(shù)突棘的數(shù)量、形狀和大小。該工具的可靠性使得可以分析神經(jīng)元的完整樹(shù)突結(jié)構(gòu)，從而可以研究特定神經(jīng)元亞型中正常和異常的神經(jīng)元樹(shù)突形態(tài)。

以下是FD Rapid GolgiStain^TM Kit的操作視頻。

FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒是一種用于神經(jīng)組織學(xué)研究的染色試劑盒，它能夠清晰揭示神經(jīng)元的精細(xì)形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括胞體、軸突、樹(shù)突及樹(shù)突棘等，是定性定量分析神經(jīng)元形態(tài)的重要工具。它通過(guò)改進(jìn)傳統(tǒng)染色技術(shù)，提供了一種更為簡(jiǎn)便、可靠的方法來(lái)研究神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)。FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒有以下特點(diǎn)：

改進(jìn)的Golgi-Cox技術(shù)：該試劑盒基于Ramon-Moliner, Glaser和Van der Loos所闡述的方法原理設(shè)計(jì)，極大地改進(jìn)并簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)的Golgi-Cox染色技術(shù)。

高靈敏度和可靠性：FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒被證實(shí)在顯示神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，尤其是樹(shù)突棘的形態(tài)細(xì)節(jié)上極為靈敏可靠。

廣泛的應(yīng)用：該試劑盒已被廣泛用于多種動(dòng)物腦組織染色，包括小鼠、大鼠以及其他動(dòng)物的腦組織。

試劑盒組分：包括Solution A、B、C、D、E，琉璃樣品回收器、天然毛畫(huà)筆、滴瓶和用戶手冊(cè)。具體容量根據(jù)試劑盒的大小（Large Kits和Small Kits）有所不同。

操作簡(jiǎn)便：與傳統(tǒng)的Golgi-Cox染色法相比，F(xiàn)D Rapid GolgiStain^TM試劑盒簡(jiǎn)化了操作步驟，減少了操作時(shí)間。

在使用FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒前的準(zhǔn)備工作

一、準(zhǔn)備試劑和材料：

確保擁有試劑盒中包含的所有溶液（溶液A、B、C、D、E）以及以下未包含在試劑盒中的物品：

雙蒸水或Milli-Q水、塑料或玻璃管或瓶、組織學(xué)耗材，包括明膠包被的顯微鏡載玻片（Cat.#PO101）、蓋玻片、染色罐、乙醇、二甲苯、樹(shù)膠封片劑Permount®、光學(xué)顯微鏡

容器準(zhǔn)備：所用容器（最好為塑料材質(zhì)）必須用蒸餾水沖洗干凈。

避免金屬器具：當(dāng)溶液A和溶液B存在時(shí)不能使用金屬器具。

保持容器密封：用溶液A和溶液B處理的組織和切片，應(yīng)該避光。

二、組織處理：

在殺死動(dòng)物之前對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行深度麻醉，并盡快地從顱骨中取出動(dòng)物的腦，操作時(shí)必須非常小心以免損傷或壓迫組織。

用雙蒸水或Milli-Q水快速?zèng)_掉組織表面的血液。

把組織浸泡在由溶液A和B等體積混合的浸漬液中，室溫下黑暗保存兩周。浸泡6個(gè)小時(shí)以后或次日更換新的浸漬液。

轉(zhuǎn)移組織到溶液C中室溫黑暗至少72小時(shí)（可長(zhǎng)達(dá)1周）。24小時(shí)后或次日至少更換一次溶液。

三、切片制備：

在-20℃到-22℃的條件下用冷凍切片機(jī)將組織切成100-200um厚的薄片。

用樣本回收器把樣本轉(zhuǎn)移到含有溶液C的明膠包被的顯微鏡載玻片上。載玻片上多余的溶液用吸管吸走并用濾紙吸干。

切片可以室溫下自然風(fēng)干，不能用電風(fēng)扇或電熱板使其干燥。

安全操作注意事項(xiàng)：在化學(xué)通風(fēng)櫥下完成實(shí)驗(yàn)，并穿戴合適的防護(hù)服、手套和眼睛及面部防護(hù)罩。

使用FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒時(shí)的注意事項(xiàng)

專用性：FD Rapid GolgiStain^TM Kit僅用于體外研究，不能用于診斷或其他應(yīng)用。

毒性警告：試劑盒所包含的試劑是有毒的，吸入或接觸皮膚是有害的，如果吞咽可能是致命的。不要用嘴吸。避免吸入和接觸皮膚和眼睛。如果接觸，立即用大量的水沖洗并求助醫(yī)生。

實(shí)驗(yàn)環(huán)境：在化學(xué)通風(fēng)櫥下完成實(shí)驗(yàn)。操作這些試劑時(shí)須穿戴合適的防護(hù)服，手套和眼睛及面部防護(hù)罩，完成實(shí)驗(yàn)之后把手沖洗干凈。

容器要求：所用容器（最好為塑料材質(zhì)）必須用蒸餾水沖洗干凈。當(dāng)溶液A和溶液B存在時(shí)不能使用金屬器具。

避光處理：用溶液A和溶液B處理的組織和切片，應(yīng)該避光。

溶液制備：溶液A和溶液B的混合液至少在用之前24小時(shí)配制，并不能攪拌。制備好的浸泡液在用之前室溫黑暗保存可長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。

組織處理：殺死動(dòng)物之前對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行深度麻醉。應(yīng)盡快地從顱骨中取出動(dòng)物的腦，但操作時(shí)必須非常小心以免損傷或壓迫組織。

切片處理：用樣本回收器把樣本轉(zhuǎn)移到含有溶液C的明膠包被的顯微鏡載玻片上。載玻片上多余的溶液用吸管吸走并用濾紙吸干。切片可以室溫下自然風(fēng)干，不能用電風(fēng)扇或電熱板使其干燥。

染色步驟：在染色過(guò)程中和蓋蓋玻片之前的任何一步都不要讓切片變干。

廢棄物處理：不要把溶液A和B的廢棄物倒進(jìn)水槽中，應(yīng)收集起來(lái)放到一個(gè)瓶子中，聯(lián)系安全辦公室或有執(zhí)照的專業(yè)廢物處理服務(wù)部門(mén)處理這些材料。

遵循這些注意事項(xiàng)可以確保實(shí)驗(yàn)的安全和有效性。

判斷FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒染色后神經(jīng)突觸的染色效果

染色深度和清晰度：染色效果良好的神經(jīng)突觸應(yīng)該顯示出明顯的黑色沉積物，這些沉積物應(yīng)該清晰地勾勒出神經(jīng)元的形態(tài)，包括樹(shù)突和樹(shù)突棘。

背景顏色：背景顏色不宜過(guò)深，深背景可能會(huì)影響對(duì)神經(jīng)突觸的觀察。如果背景顏色深，可能是因?yàn)槿芤篈和B沒(méi)有提前24小時(shí)配置或腦組織在A和B混合液中浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，超過(guò)14天。

陰性結(jié)果：如果出現(xiàn)陰性結(jié)果，可能是因?yàn)閷?dòng)物進(jìn)行灌注后再取腦進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這可能會(huì)影響染色效果。

染色均勻性：整個(gè)切片的染色應(yīng)該是均勻的，沒(méi)有明顯的染色不均或斑點(diǎn)。

神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)完整性：染色后，神經(jīng)突觸的結(jié)構(gòu)應(yīng)該是完整的，沒(méi)有明顯的斷裂或缺失。

使用圖像分析軟件：可以通過(guò)使用如Image J軟件等圖像分析工具來(lái)定量分析樹(shù)突棘數(shù)量，這是評(píng)估染色效果的一個(gè)重要手段。

避免操作錯(cuò)誤：確保在操作過(guò)程中遵循正確的步驟，避免如溶液混合不當(dāng)、組織處理不當(dāng)?shù)炔僮麇e(cuò)誤，這些都可能影響最終的染色效果。

FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒的研究成果

改進(jìn)和簡(jiǎn)化Golgi-Cox技術(shù)：FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒基于Ramón-Moliner、Glaser和Van der Loos描述的方法原理設(shè)計(jì)，顯著改善和簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)的Golgi-Cox技術(shù)。

高靈敏度和可靠性：該試劑盒被證實(shí)在顯示神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，尤其是樹(shù)突棘的形態(tài)細(xì)節(jié)方面極為靈敏可靠。

廣泛的應(yīng)用：FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒已被廣泛應(yīng)用于多種動(dòng)物大腦和死后人腦樣本的染色檢測(cè)中。

研究成果支持：有超過(guò)500篇文獻(xiàn)數(shù)據(jù)支持FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒的使用，這些文獻(xiàn)詳細(xì)記錄在試劑盒的使用手冊(cè)中。

形態(tài)學(xué)研究：使用該試劑盒可以發(fā)現(xiàn)經(jīng)藥物處理后的動(dòng)物大腦以及因神經(jīng)性疾病死亡人體大腦內(nèi)神經(jīng)樹(shù)突和樹(shù)突棘的微小形態(tài)學(xué)改變。

行為-形態(tài)關(guān)系研究：Golgi-Cox法曾用來(lái)鑒定和研究心臟自主神經(jīng)支配，顯示了其在鑒定和研究外周血組織自主神經(jīng)支配的形態(tài)學(xué)特征方面的有效性。

高爾基染色技術(shù)的應(yīng)用：FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒不僅用于解剖研究，而且廣泛用于行為-形態(tài)關(guān)系研究。

FD Rapid GolgiStain^TM試劑盒是一個(gè)在神經(jīng)形態(tài)學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)被廣泛認(rèn)可和使用的工具，它為研究神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)提供了一個(gè)可靠和高效的平臺(tái)。